核酸檢測類產(chǎn)品

1.目前“博江生物”檢測相關(guān)產(chǎn)品有哪幾大類？

答：目前我們有三大類檢測產(chǎn)品：一是核酸類產(chǎn)品，包括熒光定量PCR檢測配套產(chǎn)品；二是病毒抗原（蛋白）類檢測產(chǎn)品，包括常見豬病的膠體金抗原快速檢測卡；三是豬健康體檢類產(chǎn)品，包括豬的寒度檢測試劑盒、朊度檢測試劑盒和活度檢測試劑盒等。

2.牧康靈核酸檢測類產(chǎn)品的優(yōu)勢?

答：核酸檢測包括核酸提取和PCR反應(yīng)兩個步驟，所以包括兩種試劑盒。

其中核酸提取試劑盒我們更專業(yè)，特別是針對非洲豬瘟病毒檢測，養(yǎng)殖場對于臨床唾液樣本采集和環(huán)境監(jiān)測的特殊要求，我們開發(fā)了高效準(zhǔn)確的唾液樣本核酸提取試劑盒和環(huán)境樣本核酸提取試劑盒，通過實驗對比驗證，這兩種提取盒的效率是普通試劑盒提取量的10倍以上。

其次是熒光定量PCR檢測試劑盒，通過實驗室對比檢測，我們PCR試劑盒的靈敏度不僅檢測血液樣本靈敏度是100%，而且檢測唾液和環(huán)境樣本靈敏度也高達(dá)100%，對于豬場精準(zhǔn)檢測，精準(zhǔn)清除具有更好的指導(dǎo)意義。

3.非瘟檢測豬唾液樣本為何要用唾液專用核酸提取盒，普通提取試劑盒不能提取嗎？

答：中國動物疫病預(yù)防控制中心發(fā)布的第二批非洲豬瘟現(xiàn)場快速檢測試劑名單，包括26個企業(yè)的34個產(chǎn)品。但是實驗室測評和篩選產(chǎn)品時，檢測樣品類型僅限于豬血液和豬組織樣品。但是豬場在非瘟形勢下想存活下來，要靠早期監(jiān)測生物安全防控效果，用的樣本大多是豬的唾液和環(huán)境物質(zhì)，非瘟病毒含量低，并且不同樣本的核酸含量、酶含量、特殊雜質(zhì)含量都不一樣。所以說，目前不配套核酸提取試劑盒，僅含有核酸提取液的非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒或提取效率低的核酸提取試劑盒并不能滿足豬場的臨床檢測需求。

4.唾液樣本有何特殊性？

答：首先，唾液樣本中含有豐富的酶類物質(zhì)：有溶菌酶、唾液淀粉酶、過氧化物酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽還原酶等，大量酶類物質(zhì)會對病毒的核酸有一定的降解作用。其次，唾液樣本病毒含量本身較低，提取效率不高的試劑盒直接影響檢出率。

5.唾液樣本核酸提取盒專門用于提取唾液，那血液或其他樣本可以提取嗎？

答：唾液樣本核酸提取試劑盒適用于從唾液樣本中提取基因組DNA。試劑盒采用獨特的裂解液和緩沖液系統(tǒng)，配合高效吸附DNA的吸附膜，在一定條件下對唾液中含量不多的DNA具有極強的吸附富集能力，當(dāng)條件改變時又可以可逆地釋放DNA，從而達(dá)到快速分離純化DNA、并最大限度地去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)的目的，從而保證提取核酸的純度。

其他血液和拭子樣本也可以用該試劑盒提取，但相對而言，該試劑盒更適用于唾液樣本。

血液樣本可用普通核酸提取試劑盒即可，其他簡單的拭子樣本也可用該試劑盒提取，但若是樣本類型復(fù)雜、含雜質(zhì)較多，建議用環(huán)境樣本核酸提取試劑盒高效提取。

6、針對唾液樣本中非洲豬瘟病毒的檢測，怎樣檢測更靈敏？

答：首先唾液樣本檢測要用專門的唾液樣本核酸提取試劑盒來提取病毒核酸，這樣能更精確的抓住唾液樣本中少量的病毒核酸，便于下一步擴增檢測。其次，PCR檢測要選用高度靈敏的反應(yīng)試劑盒，普通檢測血液樣本的PCR試劑盒還不能滿足唾液樣本中低濃度核酸的檢出。所以兩種試劑盒是配套，是檢出唾液樣本中非洲豬瘟病毒的關(guān)鍵。

7.環(huán)境樣本核酸提取試劑盒主要針對什么類型的樣本？

答：環(huán)境樣本核酸提取試劑盒是專為環(huán)境樣本DNA提取而設(shè)計的，適合從各種環(huán)境如豬場土壤、底泥、漏縫地板以及各種動物糞便、尿液，豬舍內(nèi)外地面、墻面，運輸車輛各部位和人員頭發(fā)、衣物等處采集樣本，采用棉拭子蘸取足量此類樣品，從中提取高產(chǎn)量、高純度的核酸DNA。

8.環(huán)境樣本核酸提取試劑盒效果與普通核酸提取步驟有何不同？

答：產(chǎn)品試劑組成除了有傳統(tǒng)的裂解液、洗液和洗脫液，還針對環(huán)境樣本的復(fù)雜性和特殊性，增加了干珠管、S2增強裂解液、S3-腐殖酸吸附劑和S4-結(jié)合液，其中干珠管可以更好的分散樣本，讓樣本與裂解液充分接觸和裂解，S3吸附劑可選擇性吸附DNA樣品中的腐殖酸等抑制因子，提高DNA純度，檢出效率更高。增加了試劑從而增加了處理步驟，但最終提取的核酸效率是普通提取盒的10-100倍。

9.唾液和環(huán)境樣本核酸提取試劑盒的洗液在使用前都要加相應(yīng)體積的無水乙醇嗎？

答：是的。每個新提取盒第一次使用前，在兩種洗液里面都要按說明書加入相應(yīng)體積的無水乙醇才能使用。無水乙醇屬于易燃易爆化學(xué)試劑，所以不能直接放在試劑盒里運輸，需要使用單位自行購買準(zhǔn)備。如果不能購買到實驗室用的無水乙醇，可用醫(yī)用的95%酒精代替，但注意不要購買還其他復(fù)方成分的95%酒精，一定是單一成分的酒精。

10.非洲豬瘟病毒檢測有哪些檢測產(chǎn)品可供選擇？

答：目前非洲豬瘟檢測有膠體金快速檢測卡和熒光定量PCR檢測試劑盒兩種。

膠體金快速檢測卡優(yōu)點是操作簡單，檢測快速，缺點是準(zhǔn)確度只有60-70%，且僅適用于發(fā)病豬的血液樣本檢測。

豬場早期監(jiān)控和生物安全防控檢測都需要用靈敏度高的熒光定量PCR檢測試劑盒，樣本最好是無創(chuàng)采集豬唾液樣本進行檢測。

除了PCR反應(yīng)盒要選擇高度靈敏的檢測試劑盒，核酸提取步驟也要用唾液和環(huán)境樣本專用核酸提取試劑盒。這樣全面配套，才能保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，發(fā)揮豬場早期檢測的精準(zhǔn)監(jiān)控作用。

11.PCR檢測對基層豬場的實驗環(huán)境條件有何要求？

答：基層豬場PCR實驗室按照專業(yè)PCR檢測實驗室標(biāo)準(zhǔn)來建設(shè)成本太高，可通過劃分區(qū)域，通風(fēng)換氣和消毒清潔等方法來保障實驗室檢測工作的正常運行。

建議豬場檢測實驗室至少分三個區(qū)域：一是樣本處理區(qū)，用來做樣本前處理和核酸提??；二是試劑配制區(qū)，用來配制和分裝PCR反應(yīng)液，添加核酸模板等；三是PCR 擴增區(qū)，用來上機檢測，觀測結(jié)果。各工作區(qū)要有一定的物理隔離，如隔板、房間、超凈工作臺等。各區(qū)的移液槍、吸頭、離心管等實驗用品要專區(qū)專用，不能交叉混用。實驗人員進入不同區(qū)域操作時最好更換衣服和手套，防止交叉污染。

12. PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備有哪些？

答：樣品制備區(qū)：主要進行樣品的收集、保存和核酸提取，本區(qū)主要設(shè)備有冰箱，離心機，水浴鍋、渦旋振蕩器、移液槍等。試劑耗材包括核酸提取試劑盒、采樣棉簽、唾液采集包、5ml、1.5/2ml離心管、1.5ml離心管架、大中小號槍頭、生理鹽水、無水乙醇或者95%酒精、一次性手套、口罩等。

試劑配制區(qū)：主要進行PCR反應(yīng)液的配制和加樣，本區(qū)主要設(shè)備有冰箱、掌上離心機、移液槍等，主要試劑耗材包括PCR反應(yīng)管、PCR熒光檢測試劑盒、PCR管板架、75%酒精棉球等。

PCR擴增區(qū)：PCR儀上機檢測。本區(qū)主要設(shè)備有電腦、熒光PCR檢測儀等。

以上儀器、試劑和耗材可在本公司一站式配齊，無需額外購買。

13.PCR實驗室常用的消毒劑是那種？

答：PCR實驗過程要認(rèn)真細(xì)心操作，避免動作幅度過大，引起核酸形成氣溶膠污染實驗室。每次實驗完畢后用10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器，及時清理實驗產(chǎn)生的生物垃圾，最好無害化處理或者在空曠地方燒毀。

14.PCR檢測試劑盒需-20度保存，每次使用前融化，這樣反復(fù)凍融會影響檢測結(jié)果嗎？

答：PCR檢測試劑盒平時要保存在-20度冰箱，用前放在室溫或4度冰箱融化。由于反應(yīng)液中的酶和熒光物質(zhì)等對溫度敏感，建議反復(fù)使用的次數(shù)不能超過5次，最好3次左右用完。

15.通常提取試劑盒都在室溫條件下保存，里面的蛋白酶K也放在室溫可以嗎？

答：蛋白酶K需按照試劑盒說明書要求保存在2-8度或者-20度，不能跟提取盒的其他試劑一起放在常溫，這樣會大大影響酶的活性。所以建議蛋白酶K應(yīng)按照說明書要求在低溫條件單獨存放和運輸。